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糖原含量試劑盒說明書

更新時(shí)間：2019-01-23　點(diǎn)擊量：2467

貨號(hào)：YC1131 規(guī)格：100管/96樣

糖原含量試劑盒說明書

微量法

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

糖原是由葡萄糖單位構(gòu)成的高分子多糖，是糖的主要的儲(chǔ)存形式之一，主要貯存在肝和肌肉中作為備用能量，分別稱為肝糖原和肌糖原。肝糖原可調(diào)節(jié)血糖濃度，當(dāng)血糖升高時(shí)可在肝

臟合成糖原，血糖降低時(shí)，肝糖原則分解為葡萄糖以補(bǔ)充血糖。因此，肝糖原對(duì)維持血糖的相對(duì)平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的儲(chǔ)存形式,在劇烈運(yùn)動(dòng)消耗大量血糖時(shí)，肌糖原不能直接分解成血糖，必須先分解產(chǎn)生乳酸,隨血液循環(huán)到肝臟,通過糖異生轉(zhuǎn)變?yōu)楦翁窃蚱咸烟恰?/span>

測(cè)定原理：

蒽酮法。利用強(qiáng)堿性提取液提取糖原，在強(qiáng)酸性條件下利用蒽酮顯色劑測(cè)定糖原含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、濃硫酸（不允許快遞）和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：0.1mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液 10mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶， 4℃保存；

糖原提?。?/span>

1﹑細(xì)胞或細(xì)菌：收集500~1000萬細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；加入0.75mL提取液超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；轉(zhuǎn)移至10mL試管中，95℃水浴20min（蓋緊，防止水分散失），隔5min振搖試管1次，使充分混勻；取出試管冷卻后，用蒸餾水定容到5ml，混勻，8000g 25℃離心10min，取上清液待測(cè)。

2﹑組織：稱取0.1~0.2g樣品，加入0.75ml 提取液充分勻漿；轉(zhuǎn)移至10ml試管中；95℃水浴 20min（蓋緊，防止水分散失），隔5min振搖試管1次，使充分混勻；待組織全部溶解后，取出試管冷卻后，用蒸餾水定容到5ml，混勻，8000g 25℃離心10min，取上清液待測(cè)。

測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至620nm，蒸餾水調(diào)零。

2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95℃。

3、試劑二工作液的配制：在試劑二中倒入6mL蒸餾水，緩慢倒入24mL濃硫酸，充分溶解混勻后使用；用不完的試劑4℃保存一周；

4、加樣表（在 EP 管中反應(yīng)）：